?组织细胞总蛋白抽提试剂盒

货号：ZK-PL3503?

描述：从组织细胞中提取总蛋白是Western Blot的关键步骤。。。。。。。实体软组织如脑脊髓富含磷脂，，，，，神经血管含大量结缔组织，，，，，而脂肪则含有大量油脂，，，，，通例的步骤难以有效从这些组织中提取蛋白。。。。。。。本试剂盒为组织或造就细胞总蛋白提取提供齐全的解决规划。。。。。。。用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，，，，，或直接用裂解-结合缓冲液沉悬造就细胞，，，，，而后参与抽提试剂去除非蛋白成分，，，，，离心、干燥后即可得到总蛋白。。。。。。。蛋白沉淀溶化后用通例步骤进行蛋白定量。。。。。。。提取过程可在30-60分钟内实现，，，，，可在1.5mL离心管微量提取也可大规模造备，，，，，极为轻便高效。。。。。。。

规格：

50次 100次

贮存：

室温或4?C 24个月有效

操作步骤：

固体组织蛋白提取

1. 每10-100mg固体组织剪碎后参与0.5-1mL裂解液，，，，，放入玻璃匀浆器内高低手动匀浆15次；；；；；；；；或用高速机械匀浆器12,000rpm破碎组织。。。。。。。少量幼的未破碎组织不影清脆续抽提。。。。。。。把稳：肝肾脾组织蛋白含量高，，，，，提取时应加较少量的组织，，，，，通常不超过50mg,不然形成的蛋白膜厚、致密且难溶。。。。。。。

2. 仅取0.5mL组织匀浆液转移到1.5mL离心管，，，，，弃去渣滓的组织匀浆液。。。。。。。每0.5mL组织匀浆液参与2倍体积的(1mL)抽提试剂充分混匀。。。。。。。室温或4?C 静置10分钟,偶然晃悠。。。。。。。把稳：(1)如组织量<10mg,鄙人一步离心时形成的蛋白膜易碎，，，，，静置30min有助蛋白膜形成。。。。。。。(2)提取脂肪组织时应4?C 静置40min 以上以充分去除油脂。。。。。。。(3)0.5mL组织匀浆液获得的蛋白足以进行几十次Western Blot。。。。。。。保障每0.5mL 组织匀浆液参与2 倍体积的(1 mL)抽提试剂是成功的关键。。。。。。。

3. 10,000×g4?C 离心10分钟，，，，，溶液分为高低两相，，，，，两相中央为蛋白膜。。。。。。。吸除上层液体；；；；；；；；随后用吸头或针头轻轻拨开蛋白膜，，，，，吸除基层液体。。。。。。。蛋白膜将附着于离心管壁。。。。。。。把稳：(1)离心速度过高将使蛋白膜过于牢固，，，，，难以溶化。。。。。。。(2)若是不 能分相，，，，，可再参与50μl 蒸馏水混匀离心.(3)若是初始组织量较少(<10mg)，，，，，离心后难以得到齐全的蛋白膜，，，，，此时可吸去高低层液体，，，，，参与1mL 纯乙醇混匀，，，，，10,000 ×g 4?C 离心3 分钟。。。。。。。弃所有液体，，，，，蛋白沉淀在管底。。。。。。。

4. 敞开管口，，，，，室温空气干燥沉淀。。。。。。。未溶化的蛋白沉淀不含盐、去垢剂、和还原剂成分，，，，，可4?C或－20?C一年以上。。。。。。。

造就细胞蛋白提取 (拜见固体组织蛋白提取法式中的斜体字注解)

1. 消化洗涤并800g离心网络细胞。。。。。。。每5-10×106细胞参与0.5mL裂解液，，，，，振荡沉悬，，，，，4?C净置2分钟。。。。。。。

2. 按比例每0.5mL裂解液参与1mL抽提试剂，，，，，振荡混匀。。。。。。。4?C 静置10min。。。。。。。

3. 10,000g4?C 离心10分钟，，，，，溶液分为两相，，，，，两相中央为蛋白膜。。。。。。。幼心吸除上层相和大部门基层相，，，，，保留两相中央的蛋白絮状物。。。。。。。若是不能分相，，，，，可再参与50μl蒸馏水混匀离心。。。。。。。

4. 参与1mL纯乙醇洗涤沉淀。。。。。。。10,000g4?C 离心3分钟，，，，，蛋白沉淀在管底。。。。。。。

5. 去除管中所有液体，，，，，敞开管口，，，，，室温空气干燥蛋白沉淀。。。。。。。未溶化的蛋白沉淀不含盐、去垢剂、和还原剂成分,可4?C或－20?C一年以上。。。。。。。

注明

1. 依照上述提取和溶化过程，，，，，不加蛋白酶抑造剂，，，，，而蛋白不会有显著降解，，，，，用户不用(但能够)参与蛋白酶抑造剂。。。。。。。

2. 蛋白定量。。。。。。。把稳使SDS浓度稀释到不影响蛋白定量的水平，，，，，或选择不受SDS影响的BCA定量步骤.BCA法<5%SDS浓度,Bradford法<0.125%SDS浓度。。。。。。。

3. 按比例可进行大规模的(多至1g)组织蛋白提取。。。。。。。

4. 提取试剂对眼睛和呼吸系统有肯定刺激性，，，，，皮肤失慎接触可用水洗濯。。。。。。。