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产品名称:HRP急剧象征试剂盒(少量可象征0.1mg)
?产品货号:ZK-B1674Y
规格:0.5MGX2支/1MGX5支?
道理与利用:高碘酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶(HRP)的糖基,,,,,经度日化的HRP带有醛基能够与待象征物的游离氨基结合,,,,,产生希夫碱反映(Schiff's base reaction)。。。。。。。。本试剂盒合用于带有游离氨基的物质的象征,,,,,好比:带有游离氨基(伯胺)的抗体、蛋白或者幼分子化合物。。。。。。。。本试剂盒选取特有不变技术,,,,,活化HRP保留在液体中,,,,,汲取方便,,,,,少量能够象征100ug,,,,,让您的象征工作更易把控和操作!
试剂盒组成:
预活化HRP | 1mg(50UL液体/支) 5mg(250UL液体/支) |
象征启动液 | 0.5ml 2ml |
反映终止液干粉 | 2管(每管可配1ml) 5管(每管可配1ml) |
象征物保留液 | 1.5ml 6ml |
备用透析袋(MD6,,,,,截留量12KD) | 4X4CM 10X5CM |
说明书 | 1份 |
操作步骤:
1. 先去除待象征抗体或蛋白中的叠氮钠、以及含有氨基的缓冲成分物质,,,,,好比甘氨酸、Tris 等,,,,,还有EDTA等物质,,,,,可选取透析和超滤的法子置换缓冲液,,,,,以去除滋扰物质达到好的象征成效!透析或超滤缓冲液选0.01M CB,PH:9.6缓冲液(说明书附件有经验配方无需调整PH),,,,,若尝试室没有碳酸盐试剂再选取0.01M PBS(PH:7.0-7.4均可)透析或超滤置换缓冲液,,,,,调整抗体或蛋白的浓度到2MG/ML。。。。。。。。若是抗体和蛋白不含上述这些滋扰物质能够直接用上述PBS或CB缓冲液调整浓度到2MG/ML备用。。。。。。。。
2. 从4℃取出HRP象征试剂盒,,,,,使各组分充分混匀。。。。。。。。
3. 取500ul抗体或蛋白(约1mg),,,,,参与50ul预活化HRP(1mg)液体中,,,,,用移液枪反复奏乐几次混匀,,,,,混匀后参与HRP象征启动液99ul(参与启动液量凭据:每10ul蛋白和HRP混合液加1.8ul启动液)持续混匀数次,,,,,预防产生气泡。。。。。。。。而后避光30℃-37℃温箱偶联反映2-3幼时,,,,,若遇将近放工也可放4℃反映24幼时左右(此法成效一样或者更好不用不安)。。。。。。。。
4. 偶联实现将反映终止液粉管中参与1mL去离子水混匀,,,,,取50ul参与3所述反映液中(参与终止液量凭据:每1mg HRP参与终止液50ul),,,,,充分混匀,,,,,室温搁置1 幼时或者4℃ 2幼时。。。。。。。。
5. 终止实现后,,,,,可直接参与等体积的象征物保留液,,,,,充分混匀,,,,,置于-20℃保留。。。。。。。。若是想更上持久的保留建议吓酌0.067M PBS PH:7.0(说明书附件有经验配方)透析或超滤置换缓冲液后再加象征物保留液。。。。。。。。这样能够保留3年左右甚至更长。。。。。。。。
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