?活性氧ROS检测试剂盒（红色荧光）

货号：ZK-PL3955

规格：100-500次?

描述：

本试剂盒利用荧光探针DHE进行活性氧检测。。。。。DHE可自由透度日细胞膜进入细胞内，，，，，，在细胞质中呈蓝色荧光，，，，，，被细胞内的ROS氧化后形成氧化乙啶掺入染色体DNA中，，，，，，使细胞核出现明亮的红色荧光。。。。。在引发波长535nm，，，，，，发射波长610nm左近，，，，，，使用荧鲜明微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光强度，，，，，，测定细胞内活性氧水平。。。。。拥有布景低、活络度高、线性领域宽、使用方便蹬着点，，，，，，是一种急剧轻便的组织或造就活细胞中ROS经典检测步骤。。。。。

适用领域：

贴壁细胞、悬浮细胞、新鲜动物组织

工作波长：

引发波长480-535nm，，，，，，最佳发射波长590-610nm

组成：

0.2ml, 5mM DHE，，，，，，-20 ?C避光保留 一年有效

所需设备：流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计等

操作步骤：

一、 细胞样本：

1. 网络细胞，，，，，，进行活性氧测定

1.1 细胞网络：悬浮细胞：2000rpm，，，，，，离心5min，，，，，，网络沉淀，，，，，，用0.01M PBS或无血清造就液洗涤2次，，，，，，1000rpm，，，，，，离心5min，，，，，，弃上清，，，，，，取细胞沉淀；；；；；；贴壁细胞：吸去造就液，，，，，，用0.01M PBS或无血清造就液反复奏乐，，，，，，使细胞层全数进入PBS或造就液中，，，，，，网络细胞悬液，，，，，，用0.01M PBS或无血清造就液洗涤2次，，，，，，1000rpm，，，，，，离心5min，，，，，，弃上清，，，，，，取细胞沉淀；；；；；；

1.2参与DHE探针：用稀释好的DHE荧光探针沉悬细胞沉淀，，，，，，通常情况下，，，，，，细胞密度要求1*106-2*107/ml，，，，，，推荐探针初始工作浓度为10 ?M（DHE工作浓度可在1?M~100 ?M领域内，，，，，，需进行预尝试确定最适浓度）。。。。。

1.3 37 ?C孵育细胞10分钟~90分钟。。。。。通常情况下，，，，，，10-30分钟即可。。。。。把稳：孵育功夫长短与细胞类型、刺激前提、DHE浓度蹬仔关。。。。？？？？？Ｄ芄幻扛5min颠倒混匀一下，，，，，，使探针与样本充分接触。。。。。

1.4 1000g，，，，，，离心5min，，，，，，去上清网络细胞沉淀，，，，，，用PBS缓冲液洗涤2次，，，，，，沉悬细胞。。。。。

1.5 进行荧光检测，，，，，，以荧光度数值暗示了局。。。。。

2. 不网络细胞，，，，，，直接将探针参与造就基测定

2.1 参与DHE探针：去除细胞造就基上清，，，，，，参与用无血清造就液稀释好的DHE探针（推荐探针终浓度为10 ?M），，，，，，参与探针的体积以能挡住细胞为宜，，，，，，通常6孔板单孔不少于500 ?l。。。。。

2.2 37?C孵育细胞10分钟~90分钟。。。。。通常情况下，，，，，，10-30分钟即可。。。。。把稳：孵育功夫长短与细胞类型、刺激前提、DHE浓度蹬仔关。。。。？？？？？Ｄ芄幻扛5min颠倒混匀一下，，，，，，使探针与样本充分接触。。。。。

2.3 弃去上层造就液，，，，，，用0.01M PBS或无血清造就液洗涤2次，，，，，，去除未进入细胞内的探针。。。。。

2.4 进行荧光检测，，，，，，以荧光度数值暗示了局。。。。。

二、 动物组织样本

1.1 细胞悬液造备：可选取单细胞悬液造备仪或传统的组织处置步骤如：酶解法、研磨法等造备单细胞悬液；；；；；；

1.2 参与DHE探针，，，，，，参与DHE探针：去除细胞造就基上清，，，，，，参与用无血清造就液稀释好的DHE探针（推荐探针终浓度为10?M）。。。。。

1.3 37?C孵育细胞10分钟~90分钟。。。。。通常情况下，，，，，，10-30分钟即可。。。。。把稳：孵育功夫长短与细胞类型、刺激前提、DHE浓度蹬仔关。。。。？？？？？Ｄ芄幻扛5min颠倒混匀一下，，，，，，使探针与样本充分接触。。。。。

1.4 1000g，，，，，，离心5min，，，，，，去上清网络细胞沉淀，，，，，，用PBS缓冲液洗涤2次，，，，，，沉悬细胞

1.5 进行荧光检测，，，，，，以荧光度数值暗示了局。。。。。

当苦衷项：

（1）开盖前请短暂离心，，，，，，将盖内壁上的液体网络于管底，，，，，，预防开盖时染液损失。。。。。

（2）要设有无DHE孵育的对照，，，，，，即不加探针，，，，，，只用0.01M PBS沉悬的细胞。。。。。

（3）荧光探针象征后，，，，，，肯定要洗净残存的未进入细胞内的探针，，，，，，以预防布景升高。。。。。屡次洗濯时把稳操作规范，，，，，，预防将细胞洗掉。。。。。

（4）对于药物处置（孵育）功夫较短的细胞（2幼时以内、也有建议4幼时以内），，，，，，能够吓酌荧光染料进行象征，，，，，，后用药物刺激细胞后。。。。。对于药物处置功夫较长的细胞（超过4幼时或6幼时以上），，，，，，建议吓酌药物处置（刺激）细胞，，，，，，后用探针象征。。。。。

（5）DHE在光照和空气中易被氧化，，，，，，保留和操作中该把稳避光。。。。。

（6）对分歧的细胞和组织，，，，，，应选择相宜的孵育功夫和浓度，，，，，，以观察ROS的变动。。。。。

（7）为了您的安全和健全，，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。