?升级版线粒体提取试剂盒（组织和细胞通用）

货号：ZK-PL3524

规格:50次  100次 

描述：

线粒体造备试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于从组织或造就细胞中分离线粒体和细胞胞浆成分。。。。。。。参与分离溶液，，，，，，匀浆破碎组织细胞，，，，，，经过数次800g和12000g离心，，，，，，在60分钟内即可分离出齐全的线粒体和胞浆成分。。。。。。。造备的线粒体拥有很高的生物学活性，，，，，，可进行各类职能钻研如酶学测定，，，，，，更可用于Western Blot、2D-胶、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等钻延祝。。。。。。

严格依照注明操作，，，，，，总是能造备获得高纯度线粒体。。。。。。。一篇步骤学钻研论文发现，，，，，，用普利莱试剂盒造备线粒体的得率、活性、纯杜着于蔗糖密度梯度离心法和Invotrogen/Pierce线粒体提取试剂盒步骤。。。。。。。

合用：

从组织、造就细胞造备高纯度线粒体，，，，，，同时辰离细胞胞浆成分。。。。。。。

组成：

Mito Solution  100ml for 50次造备；；；；；；；；200ml for 100次造备

贮存：

?20?C 12个月有效

操作步骤：

以下所有操作均在4?C进行

1.组织匀浆：100~200mg新鲜组织如肝、脑、肾、心肌等，，，，，，剪为0.5cm2 碎块放入幼容量玻璃匀浆器内。。。。。。。估计组织块总体积。。。。。。。参与1.5ml冰预冷的Mito

Solution。。。。。。。用间隙严紧的研杵高低研磨组织20次。。。。。。。

造就细胞匀浆：800×g 5min离心网络细胞。。。。。。。单次提取需2-5×107个细胞。。。。。。。参与1.5ml冰预冷Mito Solution沉悬细胞，，，，，，将细胞悬液转移到幼容量玻璃

匀浆器内，，，，，，用间隙缜密的研杵研磨细胞30次。。。。。。。

2.将匀浆液转移到离心管中，，，，，，800×g，，，，，，4?C离心5min。。。。。。。（胞核、膜碎片、未裂解细胞等在管底，，，，，，弃去）

3.网络上清液并转移到新的离心管。。。。。。。再次800×g离心5min at 4?C，，，，，，弃沉淀。。。。。。。

4.将上清液转移到新的离心管。。。。。。。10,000×g离心10min 4 ?C。。。。。。。线粒体沉淀在管底。。。。。。。离心后的上清含胞浆成分，，，，，，可网络用于对照尝试。。。。。。。

5.洗涤线粒体：参与0.2ml Mito Solution，，，，，，轻弹管底沉悬线粒体沉淀；；；；；；；；12,000×g离心10min 4?C。。。。。。。弃上清，，，，，，线粒体沉淀在管底。。。。。。。

6.沉悬线粒体：能够用Mito Solution沉悬线粒体沉淀，，，，，，也能够用相宜后续尝试的自备缓冲液来裂解线粒体沉淀，，，，，，具体用量是：约每100mg组织提取的

线粒体用50?l，，，，，，约每5×107个细胞提取的线粒体用100?l。。。。。。。用量请凭据组织或细胞类型进行微调。。。。。。。

7.裂解线粒体后，，，，，，进行蛋白浓度测定。。。。。。。立即便用或?70?C保留。。。。。。。

注明：

1.造备高质量线粒体的关键：第一，，，，，，全程低温操作，，，，，，将样品管放在冰水浴而不是碎冰块中；；；；；；；；第二，，，，，，急剧，，，，，，微量造备比大规模造备操作更急剧，，，，，，更容易

获得齐全的线粒体，，，，，，且得率高；；；；；；；；第三，，，，，，在不粉碎亚细胞器的情况下破碎细胞是造备线粒体的最关键环节。。。。。。。破碎成效与组织细胞类型有关；；；；；；；；与组织块相

比，，，，，，贴壁造就细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁。。。。。。。用1-3ml幼容量玻璃匀浆器(而不是其它破碎装置)高低研磨造就细胞20-30次。。。。。。。玻璃匀浆器

须配套选用间隙缜密的研杵，，，，，，其特点是将研杵插入匀浆器套管后，，，，，，可提起研杵而套管不会脱落。。。。。。。正确的匀浆不是旋转研杵，，，，，，而是高低缓慢推拉研

杵，，，，，，研杵推动和提升过程中细胞遭逢压力的剧变而破碎。。。。。。。研磨水平可用相差显微镜进行查抄当未裂解细胞在~50%即可。。。。。。。过度研磨会粉碎线粒体，，，，，，而研

磨不及将降低线粒体得率。。。。。。。

2.若是不得不用电动匀浆器(polytron)，，，，，，可选用6500转，，，，，，刀头高低进出4次共计10秒。。。。。。。分歧的电动匀浆器机能差距甚大，，，，，，除非步步监测，，，，，，不然分离了局

难以意料。。。。。。。

3.分歧的离心理必须跟据离心力g推算正确的离心转速(允许10%颠簸)，，，，，，不然将导致不纯。。。。。。。

4.进行Western Blot可直接用RIPA裂解液或SDS-PAGE样品缓冲液裂解线粒体；；；；；；；；也可吓酌Mito Solution沉悬线粒体，，，，，，再参与2x SDS-PAGE样品缓冲液。。。。。。。

5.Cytochrome oxidase, Monoamine oxidase, Succinate dehydrogenas, Glutamate dehydrogenase可用作线粒体的标志酶。。。。。。。

6.沉悬线粒体：能够用Mito Solution沉悬线粒体沉淀，，，，，，也能够用相宜后续尝试的自备缓冲液来裂解线粒体沉淀具体用量是：约每100mg组织提取的线

粒体用50?l，，，，，，约每5×10^7个细胞提取的线粒体用100?l。。。。。。。用量请凭据组织或细胞类型进行微调。。。。。。。

7.裂解线粒体后，，，，，，进行蛋白浓度测定。。。。。。。立即便用或?70?C保留。。。。。。。