货号：ZK-PL3440?

?产品浓度：10mg/ml

Selection antibiotic: cell culture tested, sterile reagent

作用机理：

Blasticidin S是一种来自Streptomyces griseochromogenes的核苷类抗生素，，，，，，，，通过滋扰核糖体中肽键的形成来特异性地抑造原核和真核生物的蛋白质合成。。。。。。Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。。。。。。杀稻瘟菌素拥有急剧而强效的作用模式，，，，，，，，很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速殒命。。。。。。
抗性基因：
目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种，，，，，，，，一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙；；；；；；泼富騜ls，，，，，，，，另表两种是脱氨酶基因，，，，，，，，蕴含从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。。。。。。Bsr和 BSD基因是最常用的筛选标志，，，，，，，，用于哺乳动物和植物细胞的基因转移尝试，，，，，，，，也可用于E.Coli。。。。。。
运输与保留步骤
冰袋（wet ice）运输。。。。。。收到产品后放到-20 ?C保留，，，，，，，，有效期至少1年，，，，，，，，预防反复冻融。。。。。。
利用浓度：
1）Escherichia coli
E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差，，，，，，，，但是转化子对Blasticidin S拥有耐受性，，，，，，，，能够用低盐LB造就基（pH 8）进行筛选，，，，，，，，浓度领域为50-100 μg/ml Blasticidin S。。。。。。高pH值能够提高Blasticidin S的活性。。。。。。
2）哺乳动物细胞
哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度领域在1-50 μg/ml。。。。。。初次尝试建议通过灭杀曲线来确定最佳使用浓度。。。。。。
- 25-100 ?g/ml in bacteria
- 1-30 ?g/ml in mammalian cells
操作步骤（哺乳动物稳转株筛选！！！。。
Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/ml。。。。。。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中，，，，，，，，在含有Blasticidin S的正常成长造就基中孵育，，，，，，，，用于筛选不变转染细胞株。。。。。。
（1）转染后48h，，，，，，，，用含有合适浓度Blasticidin S的新鲜造就基将细胞传代（注：细胞处于活跃割裂期时抗生素工作最好。。。。。。细胞密度太高，，，，，，，，抗生素效能降低。。。。。。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%）；；；；；；
（2）每3-4天去除造就基，，，，，，，，参与含抗生素的新鲜造就基；；；；；；
（3）7天后检测细胞集落形成。。。。。。凭据宿主细胞种类和转染/筛选效能，，，，，，，，集落形成可能必要增长一周或更久。。。。。。

（4）转移5-10个耐受克隆到35mm细胞盘中，，，，，，，，参与选择造就基维持造就7天。。。。。。随后用细胞毒性尝试进行检测。。。。。。