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突破性技术实时捕获基因表白的关键早期步骤


乐投letou生物报路:性命的活动是通过蛋白质的造作而产生的,,,,, ,,,蛋白质赋予乐投letou细胞结构和职能。。 。 。。 。细胞蛋白质从DNA编码的基因指令中获得前进挨次,,,,, ,,,他们的序列首先被复造并在一个叫做转录的多步骤过程中被造作成RNA。。 。 。。 。

科罗拉多州立大学的一个钻研合作项目专门钻研高分辨率荧鲜明微镜和推算模型,,,,, ,,,以实时、精密地可视化和描述这类性命过程,,,,, ,,,在单基因水平上。。 。 。。 。此刻,,,,, ,,,由博士后钻研员Linda Forero-Quintero辅导的科学家们初次通过纪录RNA聚合酶在何处、何时以及若何通过与DNA序列结合启动转录来观察早期RNA转录动力学。。 。 。。 。

这项突破性技术,,,,, ,,,详见《Nature Communications》杂志,,,,, ,,,有无数可能的拓展:蕴含加深对根基生物学过程的理解,,,,, ,,,揭示某些疾病的遗传基础。。 。 。。 。

“这是第一次有人钻研单拷贝基因中的RNA聚合酶磷酸化动力学,,,,, ,,,”Forero说,,,,, ,,,他是蒙福特生物化学教授Tim Stasevich和副教授Brian Munsky的结合造就博士后钻研员。。 。 。。 。“在从前,,,,, ,,,这种早期的转录活动只能通过基因阵列来观察,,,,, ,,,这是由数百个基因拷贝组成的人为结构,,,,, ,,,在细胞核中并不常见。。 。 。。 。”

Stasevich和Munsky辅导了一项由W.M.Keck基金会和国度通常医学科学钻研所赞助的合作,,,,, ,,,旨在揭示和量化活的单细胞中的实时基因表白。。 。 。。 。在这两个尝试室工作的Forero在合作的赞助下,,,,, ,,,以前钻研过与神经疾病有关的细胞膜中的蛋白质和转运体。。 。 。。 。

早期转录活性

如《Nature Communications》中所述,,,,, ,,,Forero等人设计了一种步骤,,,,, ,,,使用已成立的哺乳动物细胞系、工程荧光抗体片段和定造的超分辨率显微镜,,,,, ,,,以活泼的色彩(蓝色、绿色和红色)捉拿早期转录过程。。 。 。。 。更具体地说,,,,, ,,,他们观察到当RNA聚合酶II(RNAP2)转录酶被磷酸化或被磷酸基团建饰时,,,,, ,,,转录周期的起头,,,,, ,,,Munsky说:“这里的跨学科科学是新的尝试能力和单细胞动力学的机械推算模型的奇妙结合,,,,, ,,,两者在各自领域都极度新鲜。。 。 。。 。”在尝试室里,,,,, ,,,钻研人员将他们的抗体片段加载到一个已成立的哺乳动物细胞系中,,,,, ,,,该细胞系含有一个汇报基因,,,,, ,,,当被转录时,,,,, ,,,会被一个荧光象征的蛋白质点亮。。 。 。。 。Stasevich在几年前援手开发的抗体片段,,,,, ,,,用荧光分子象征,,,,, ,,,照亮RNAP2尾部的特定靶点。。 。 。。 。将这些象征技术结合起来,,,,, ,,,钻研人员能够分辨转录周期中的三个分歧步骤,,,,, ,,,并用分歧的色彩象征。。 。 。。 。用该系统获得的图像转化为荧光强度颠簸。。 。 。。 。而后,,,,, ,,,钻研人员利用这些信号来诠释RNAP2磷酸化在整个转录周期中在单个拷贝基因上的时空组织将其转化为基于随机微分方程的推算模型。。 。 。。 。通过拟合这个统计模型来沉现所有的尝试了局,,,,, ,,,推算团队随后扩大了他们的分析,,,,, ,,,以网络有关分歧分子及其转录过程中状态的新的机械和定量信息。。 。 。。 。

例如,,,,, ,,,他们估计了有几多单个RNA聚合酶分子荟萃在DNA启动子区域形成短暂的簇,,,,, ,,,这些簇持续多久,,,,, ,,,以及聚合酶若何、何时、何地沿着DNA散布。。 。 。。 。例如,,,,, ,,,他们发现,,,,, ,,,每一次转录活动城市在基因的启动子区域产生一个由5到40个RNA聚合酶组成的簇,,,,, ,,,其中46%最终成功地转录了RNA。。 。 。。 。他们还发现,,,,, ,,,每一个RNA在开释前约莫必要5分钟能力被齐全转录和处置。。 。 。。 。

Forero说,,,,, ,,,这项技术拥有深远的潜力,,,,, ,,,出格是与诸如CRISPR这样的新技术相结合,,,,, ,,,在这种技术中,,,,, ,,,特定的基因能够被遴选出来并加以把持。。 。 。。 。选择某个感兴致的基因,,,,, ,,,好比说与疾病有关的基因,,,,, ,,,并利用CSU钻研人员对转录周期的实时读数,,,,, ,,,能够让钻研人员在单个基因的活动水平上观察疾病过程,,,,, ,,,在一个基因中,,,,, ,,,基因是这项工作最令人兴奋的方面

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