1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs别离报路将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定步骤，，，，，，，即酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。。。。。。ELISA此刻已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ，，，，，，，它是一种特殊的试剂分析步骤，，，，，，，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。。。。。。

酶联免疫吸附剂测定法，，，，，，，简称酶联免疫法，，，，，，，或者ELISA法。。。。。。
它的中心就是让抗体与酶复合物结合，，，，，，，而后通过显色来检测。。。。。。

一、根基道理：
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表表，，，，，，，并维吃熹免疫活性。。。。。。
②使抗原或抗体与某种酶衔接成酶标抗原或抗体，，，，，，，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，，，，，，，又保留酶的活性。。。。。。在测按时，，，，，，，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按分歧的步骤与固相载体表表的抗原或抗体起反映。。。。。。用洗涤的步骤使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分隔，，，，，，，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成肯定的比例。。。。。。参与酶反映的底物后，，，，，，，底物被酶催化变为有色产品，，，，，，，产品的量与标本中受检物质的量直接有关，，，，，，，故可凭据色彩反映的深浅来进行定性或定量分析。。。。。。由于酶的催化频率很高，，，，，，，故可极大地放大反映成效，，，，，，，从而使测定步骤达到很高的敏感度。。。。。。
ELISA可用于测定抗原，，，，，，，也可用于测定抗体。。。。。。在这种测定步骤中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体
②酶象征的抗原或抗体
③酶作用的底物（显色剂）。。。。。。凭据试剂的起源和标本的性状以及检测的具备前提，，，，，，，可设计出各类分歧类型的检测步骤。。。。。。

二、当苦衷项：
⒈　正式试验时，，，，，，，应别离以阳性对照与阴性对照节造试验前提，，，，，，，待检样品应作一式二份，，，，，，，以保障尝试了局的正确性。。。。。。有时本底较高，，，，，，，注明有非特异性反映，，，，，，，可选取羊血清、兔血清或BSA等封关。。。。。。
⒉　在ELISA中，，，，，，，进行各项尝试前提的选择是很沉要的，，，，，，，其中蕴含：
⑴　固相载体的选择：很多物质可作为固相载体，，，，，，，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。。。。。。其大局可所以凹孔平板、试管、珠粒等。。。。。。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。。。。。。不论何种载体，，，，，，，在使用前均可进行筛选！！！！。河玫攘靠乖，，，，，，，在统一尝试前提下进行反映，，，，，，，观察其显色反映是否均一性，，，，，，，据此判明其吸附机能是否优良。。。。。。
⑵ 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表表时，，，，，，，要求纯度要好，，，，，，，吸附时通常要求PH在9.0～9.6之间。。。。。。吸附温度，，，，，，，功夫及其蛋白量也有肯定影响，，，，，，，通常多选取4℃18～24幼时。。。。。。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用分歧的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，，，，，，，在其它试验前提一样时，，，，，，，观察阳性标本的OD值。。。。。。选择OD值最大而蛋白量至少的浓度。。。。。。对于无数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。。。。。。
⑶　酶象征抗体工作浓度的选择：首吓酌直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶象征抗体部份）。。。。。。而后再固定其它前提或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶象征抗体别离为分歧的稀释度）在正式尝试系统里正确地滴定其工作浓度。。。。。。
⑷　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有显著地显色反映，，，，，，，而自身无色。。。。。。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，，，，，，，该把稳防护。。。。。。有前提者应使用不致癌、活络度高的供氢体，，，，，，，如TMB和ABTS是当前较为中意的供氢体。。。。。。底物作用一段功夫后，，，，，，，应参与强酸或强碱以终止反映。。。。。。通常底物作用功夫，，，，，，，以10-30分钟为宜。。。。。。底物使用液必须新鲜配造，，，，，，，尤其是H2O2在临用前参与。。。。。。

三、检测步骤：
ELISA用血清来检测，，，，，，，首先血液要经过至少半个幼时的凝聚，，，，，，，而后取血清。。。。。。将酶复合物用稀释液稀释后，，，，，，，加血清及阴性、阳性对照，，，，，，，还有就是质控品（这是严格的要求，，，，，，，它的领域必须在质控领域内）。。。。。。经过一个幼时的孵育，，，，，，，而后洗板，，，，，，，加底物，，，，，，，半个幼时避光反映后加终止液即实现反映部门，，，，，，，而后就是读数。。。。。。由数致反判断了局的阴性或阳性。。。。。。

四、检测步骤：
一）双抗体夹心法
双抗体夹心法是检测抗原最常用的步骤，，，，，，，操作步骤如下：
一、将特异性抗体与固相载体衔接，，，，，，，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。。。。。。
二、加受检标本：使之与固相抗体接触反映一段功夫，，，，，，，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，，，，，，，形成固相抗原复合物。。。。。。洗涤除去其他未结合的物质。。。。。。
三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。。。。。。彻底洗涤未结合的酶标抗体。。。。。。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正有关。。。。。。
四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产品。。。。。。凭据色彩反映的水平进行该抗原的定性或定量。。。。。。
凭据同样道理，，，，，，，将大分子抗原别离造备固相抗原和酶标抗原结合物，，，，，，，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。。。。。。
在临床检验中，，，，，，，此法合用于检验各类蛋白质等大分子抗原，，，，，，，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。。。。。。只有获得针对受检抗原的异性抗体，，，，，，，就可用于包被固相载体和造备酶结合物而成立此法。。。。。。如抗体的起源为抗血清，，，，，，，包被和酶标用的抗体最好别离取自分歧种属的动物。。。。。。如利用单克隆抗体，，，，，，，通常选择两个针匹敌原上分歧决定簇的单抗，，，，，，，别离用于包被固相载体和造备酶结合物。。。。。。这种双位点夹心法拥有很高的特异性，，，，，，，并且能够将受检标本和酶标抗体一路保温反映，，，，，，，作一步法检测。。。。。。
在一步法测定中，，，，，，，当标本中受检抗原的含量很高时，，，，，，，过量抗原别离和固相抗体及酶标抗体结合，，，，，，，而不再形成"夹心复合物"。。。。。。类同于沉淀反映中抗原过剩的后带景象，，，，，，，此时反映后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与尺度曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值一样，，，，，，，如按常法测读，，，，，，，所得了局将低于现实的含量，，，，，，，这种景象被称为钩状效应（hook effect），，，，，，，由于尺度曲线达到顶峰后呈钩状弯落。。。。。。钩状效应严沉时，，，，，，，反映甚至可不显色而出现假阴性了局。。。。。。因而在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，，，，，，，该把稳可测领域的最高值。。。。。。用高亲和力的单克隆抗体造备此类试剂可减弱钩状效应。。。。。。
倘若在被测分子的分歧位点上含有多个一样的决定簇，，，，，，，例如HBsAg的a决定簇，，，，，，，也可用针对此决定的统一单抗别离包被固相和造备酶结合物。。。。。。但在HBsAg的检测中该把稳亚型问题，，，，，，，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，，，，，，，显然每种亚型均有一样的a决定簇的反映性，，，，，，，这也是用单抗作夹心法该把稳的问题。。。。。。
双抗体夹心法测抗原的另一把稳点是类风湿因子（RF）的滋扰。。。。。。RF是一种自身抗体，，，，，，，多为IgM型，，，，，，，能和多种动物IgG的Fc段结合。。。。。。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，，，，，，，它可充任抗原成份，，，，，，，同时与固相抗体和酶标抗体结合，，，，，，，阐发出假阳性反映。。。。。。选取F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，，，，，，，由于去除了Fc段，，，，，，，从而可解除RF的滋扰。。。。。。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，，，，，，，已被列为这类试剂的一项查核指标（拜见6.2）。。。。。。
双抗体夹心法合用于测定二价或二价以上的大分子抗原，，，，，，，但不合用于测定半抗原及幼分子单价抗原，，，，，，，因其不能形成两位点夹心。。。。。。

双抗原夹心法测抗体
反映模式与双抗体夹心法类似。。。。。。用特异性抗原进行包被和造备酶结合物，，，，，，，以检测相应的抗体。。。。。。与间接法测抗体的分歧之处为以酶标抗原包办酶标抗抗体。。。。。。此法中受检标本不需稀释，，，，，，，可直接用于测定，，，，，，，因而其敏感度相对高于间接法。。。。。。乙肝标志物中抗HBs的检测常选取本法。。。。。。本法关键在于酶标抗原的造备，，，，，，，应凭据抗原结构的分歧，，，，，，，寻找相宜的象征步骤。。。。。。

二）双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时，，，，，，，如利用针匹敌原分子上两个分歧抗原决定簇的单克隆抗体别离作为固相抗体和酶标抗体，，，，，，，则在测按时可使标本的参与和酶标抗体的参与两步并作一步。。。。。。这种双位点一步不只简化了操作，，，，，，，缩短了反映功夫，，，，，，，如利用高亲和力的单克隆抗体，，，，，，，测定的敏感性和特异性也显著提高。。。。。。单克隆抗体的利用使测定抗原的ELISA提高到新水平。。。。。。
在一步法测定中，，，，，，，该把稳钩状效应（hookeffect），，，，，，，类同于沉淀反映中抗原过剩的后带景象。。。。。。当标本中待测抗原浓度相当高时，，，，，，，过量抗原别离和固相抗体及酶标抗体结合，，，，，，，而不再形成夹心复合物，，，，，，，所得了局将低于现实含量。。。。。。钩状效应严沉时甚至可出现假阴性了局。。。。。。

三）间接法测抗体
间接法是检测抗体最常用的步骤，，，，，，，其道理为利用酶象征的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，，，，，，，故称为间接法。。。。。。操作步骤如下：
⑴将特异性抗原与固相载体衔接，，，，，，，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。。。。。。
⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，，，，，，，形成固相抗原抗体复合物。。。。。。经洗涤后，，，，，，，固相载体上只留下特异性抗体。。。。。。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，，，，，，，在洗涤过程中被洗去。。。。。。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，，，，，，，从而使该抗体间接地象征上酶。。。。。。洗涤后，，，，，，，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。。。。。。例如欲测人对某种疾病的抗体，，，，，，，可用酶标羊抗人IgG抗体。。。。。。
⑷加底物显色：色彩深度代表标本中受检抗体的量。。。。。。
本法重要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。。。。。。间接法的利益是只有变换包被抗原就可利用统一酶标抗抗体成立检测相应抗体的步骤。。。。。。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。。。。。。固然有时用粗提抗原包被也能获得现实有效的了局，，，，，，，但应尽可能予以纯化，，，，，，，以提高试验的特异性。。。。。。出格该把稳除去能与通常健全人血清产生反映的杂质，，，，，，，例如以E.Coli为工程酶的沉组抗原，，，，，，，如其中含有E.Coli成份，，，，，，，很可能与受过E.Coli习染者血清中的抗E.Coli抗体产生反映。。。。。？？？？？乖幸膊荒芎杏朊副昕谷薎g反映的物质，，，，，，，例如来自人血浆某人体组织的抗原，，，，，，，如不将其中的Ig去除，，，，，，，试验中也产生假阳性反映。。。。。。另表如抗原中含有无关蛋白，，，，，，，也会因竞争吸附而影响包被成效。。。。。。
间接法中另一种滋扰成分为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。。。。。。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一幼部门。。。。。。IgG的吸附性很强，，，，，，，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，，，，，，，有时也可吸附到包被抗原的表表。。。。。。因而在间接法中，，，，，，，抗原包被后通常用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，，，，，，，以封关（blocking）固相上的空余间隙。。。。。。另表，，，，，，，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），，，，，，，以预防过高的阴性本底影响了局的判断。。。。。。

四）竞争法
竞争法可用于测定抗原，，，，，，，也可用于测定抗体。。。。。。以测定抗原为例，，，，，，，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，，，，，，，因而结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。。。。。。操作步骤如下：
⑴将特异抗体与固相载体衔接，，，，，，，形成固相抗体。。。。。。洗涤。。。。。。
⑵待测管中加受检标本和肯定量酶标抗原的混合溶液，，，，，，，使之与固相抗体反映。。。。。。如受检标本中无抗原，，，，，，，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。。。。。。如受检标本中含有抗原，，，，，，，则与酶标抗原以同样的机遇与固相抗体结合，，，，，，，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机遇，，，，，，，使酶标抗原与固相载体的结合量削减。。。。。。参考管中只加酶标抗原，，，，，，，保温后，，，，，，，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。。。。。。洗涤。。。。。。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，，，，，，，故色彩最深。。。。。。参考管色彩深杜纂待测管色彩深度之差，，，，，，，代表受检标本抗原的量。。。。。。待测管色彩越淡，，，，，，，暗示标本中抗原含量越多。。。。。。通常情况，，，，，，，是通过方波伏安法，，，，，，，检测造就系统的峰电流，，，，，，，通过峰电流与抗原抗体的线性关下反最终确定系统的最终检测指标的浓度。。。。。。
当抗原资猜中的滋扰物质不易除去，，，，，，，或不易得到足够的纯化抗原时，，，，，，，可用此法检测特异性抗体。。。。。。其道理为标本中的抗体和肯定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。。。。。。标本中抗体量越多，，，，，，，结合在固相上的酶标抗体愈少，，，，，，，因而阳性反映呈色浅于阴性反映。。。。。。如抗原为高纯度的，，，，，，，可直接包被固相。。。。。。如抗原中会有滋扰物质，，，，，，，直接包被不易成功，，，，，，，可选取捕获包被法，，，，，，，即先包被与固相抗原相应的抗体，，，，，，，而后参与抗原，，，，，，，形成固相抗原。。。。。。洗涤除去抗原中的杂质，，，，，，，而后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反映。。。。。。竞争法测抗体有多种模式，，，，，，，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，，，，，，，抗HBc ELISA通常选取此法。。。。。。另一种模式为将标本与抗原一路参与到固相抗体中进行竞争结合，，，，，，，洗涤后再参与酶标抗体，，，，，，，与结合在固相上的抗原反映。。。。。？？？？？笻Be的检测通常选取此法。。。。。。

五）捕获法
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，，，，，，，后者会滋扰IgM抗体的测定。。。。。。因而测定IgM抗体多用捕获法，，，，，，，先将所有血清IgM（蕴含异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，，，，，，，在去除IgG后再测定特异性IgM。。。。。。操作步骤如下：
⑴将抗人IgM抗体衔接在固相载体上，，，，，，，形成固相抗人IgM。。。。。。洗涤。。。。。。
⑵参与稀释的血清标本：保温反映后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。。。。。。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。。。。。。
⑶参与特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。。。。。。洗涤。。。。。。
⑷参与针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反映结合。。。。。。洗涤。。。。。。
⑸加底物显色：如有色彩显示，，，，，，，则暗示血清标本中的特异性IgM抗体存在，，，，，，，是为阳性反映。。。。。。 [1] 

五、利用于ELISA
亲和素是一种糖蛋白，，，，，，，可由蛋清中提取。。。。。。分子量60kD，，，，，，，每个分子由4个亚基组成，，，，，，，能够和4个生物素分子亲切结合。。。。。。维生素H，，，，，，，分子量244.31，，，，，，，存在于蛋黄钟祝。。。。。用化学步骤造成的衍生物，，，，，，，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，，，，，，，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大幼分子形成生物素化的产品。。。。。。亲和素与生物素的结合，，，，，，，虽不属免疫反映，，，，，，，但特异性强，，，，，，，亲和力大，，，，，，，两者已经结合就极为不变。。。。。。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合地位，，，，，，，能够衔接更多的生物素化的分子，，，，，，，形成一种类似晶格的复合体。。。。。。因而把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，，，，，，，就可大提高ELISA的敏感度。。。。。。
亲和素－生物素系统在ELISA中的利用有多种大局，，，，，，，可用于间接包被，，，，，，，亦可用于终反映放大。。。。。？？？？Ｄ芄辉诠滔嗌舷仍ぐ磺缀退，，，，，，，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，，，，，，，通过亲和素－生物素反映而使生物素化的抗体或抗在相化。。。。。。这种包被法不仅可增长吸附的抗体或抗原量，，，，，，，并且使其结合点充分露出。。。。。。另表，，，，，，，在通例ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体代替，，，，，，，而后衔接亲和素－酶结合物，，，，，，，以放大反映信号。。。。。。

六、ELISA的试剂
在临床检验中通常选取商品试剂盒进行测定。。。。。。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。。。。。。齐全的ELISA试剂盒蕴含以下各组分：
⑴已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；；；；；；；
ELISA试剂
ELISA试剂
⑵酶象征的抗原或抗体（结合物）；；；；；；；
⑶酶的底物；；；；；；；
⑷阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），，，，，，，参考尺度品和节造血清（定量测定中）；；；；；；；
⑸酶联物（结合物）及标本的稀释液；；；；；；；
⑹洗涤液；；；；；；；
⑺酶反映终止液。。。。。。

七、用于象征的酶：
用于象征抗体或抗抗体的酶须拥有下列个性：有高度的活性和敏感性；；；；；；；在室温下不变；；；；；；；反映产品易于显露；；；；；；；能商品化出产。。。。。。当前利用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，，，，，，，其中以HRP利用最广。。。。。。 
过氧化物酶
过氧化物酶宽泛散布于植物中，，，，，，，辣根中含量最高，，，，，，，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），，，，，，，是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉组成的一种糖蛋白（含糖量18%），，，，，，，分子量约40 000，，，，，，，约由300个氨基酸组成，，，，，，，等电点为pH 3-9，，，，，，，催化反映的最适pH值因供氢体分歧而稍有差距，，，，，，，通常多在pH 5左右。。。。。。此酶溶于水和50%鼓和度以下的硫酸铵溶液。。。。。。酶蛋白和辅基的最大吸收光谱别离为275nm和403nm。。。。。。
酶的纯度以RZ暗示：RZ=OD403/OD275
纯酶的RZ多在3.0以上，，，，，，，最高为3.4。。。。。。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，，，，，，，非酶蛋白约占 75%，，，，，，，不能用于象征。。。。。。RZ在2.5以上者方可用于象征。。。。。。HRP的作用底物为过氧化氢，，，，，，，催化反映时的供氢体有几种：（1）邻苯二胺（OPD），，，，，，，产品为橙色，，，，，，，可溶性，，，，，，，敏感性高，，，，，，，最大吸收值在490nm，，，，，，，可用肉眼观察判断，，，，，，，容易被浓H2SO4终止反映，，，，，，，色彩可在数幼时内不扭转,是目前国内ELISA中最常用的一种；；；；；；；（2）联大茴香胺（OD）,产品为橘黄色，，，，，，，最大吸收值在400nm，，，，，，，色彩较不变；；；；；；；（3）5－氨基水杨酸（5－AS）：产品为深棕色，，，，，，，最大吸收值在449nm，，，，，，，部门溶化，，，，，，，敏感性较差；；；；；；；（4）邻联甲苯胺（OT）产品为蓝色，，，，，，，最大吸收值在630nm，，，，，，，部门溶化，，，，，，，不不变，，，，，，，不耐酸，，，，，，，但反映快，，，，，，，色彩显著。。。。。。

碱性磷酸酶
系从幼牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，，，，，，，由多个同功酶组成。。。。。。它们的底物种类好多，，，，，，，常用者为硝基苯磷酸盐，，，，，，，廉价无毒性。。。。。。酶解产品呈黄色，，，，，，，可溶，，，，，，，最大吸收值在400nm。。。。。。酶的活性以在pH10反映系统中，，，，，，，37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单元。。。。。。

八、酶象征法
酶与抗体交联，，，，，，，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。。。。。。郭春祥成立的HRP象征抗体的改进过碘酸钠法单一易行，，，，，，，象征成效好，，，，，，，出格合用于尝试室的幼批量造备。。。。。。其象征法式为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，，，，，，，参与新鲜配造的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，，，，，，，混匀置4℃冰箱30分钟 ，，，，，，， 取出参与0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，，，，，，，室温搁置30分钟后参与含5(g纯化抗体的水溶液1ml，，，，，，，混匀并装透析袋，，，，，，，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6幼时（或过夜）使之结合，，，，，，，而后吸出，，，，，，，加硼氢化钠（NaBH4）溶液（ 5(g/ml)0.2ml，，，，，，，置4℃冰箱2幼时，，，，，，，将上述结合物混合液参与等体积鼓和硫酸铵溶液，，，，，，，置4℃冰箱30分钟后离心，，，，，，，将所得沉淀物溶于一些0.02mol/L、pH7.4PBS中，，，，，，，并对之透析过夜（4℃），，，，，，，次日离心除去不溶物，，，，，，，即得到酶标抗体，，，，，，，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，，，，，，，进行测定后，，，，，，，冷冻干燥或低温保留。。。。。。
九、成效测定
酶标抗体象征成效测定：测定内容蕴含酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。。。。。。